Tecnologías rápidas para recuento microbiológico de Millipore

Detección y Cuantificación de microorganismos en solo una cuarta parte del tiempo: Una de las búsquedas permanentes de la industria es la de tecnologías que permitan realizar la cuantificación de microorganismos de la forma más rápida posible, y Merck Millipore está en esa búsqueda.

P1

Los más recientes hallazgos que ha convertido en productos comerciales nuestro representado, se fundamentan en la aplicación de dos diferentes técnicas de bio fluorescencia, para complementar la técnica tradicional de filtración por membrana para contar los microorganismos.

El primero de estos hallazgos dio origen a dos productos: el EZ-Fluo y el Milliflex Quantum, en estas plataformas se usa la misma técnica estándar de filtración por membrana, y mediante la aplicación de la fluorescencia para detectar los microorganismos en sus primeras horas de desarrollo, es posible reducir el tiempo de incubación para creación de colonias a una cuarta parte, la detección se lleva a cabo mediante tinción fluorescente y el uso de sensores ópticos tipo CCD, con los cuales es posible observar las micro colonias producidas para cuantificar con objetividad y exactitud.

La técnica de fluorescencia se basa en que las micro colonias son teñidas con reactivo que es metabolizado por las enzimas de los microorganismos liberando un compuesto fluorescente en el citoplasma de las bacterias, esto asegura que cuando se observan señales fluorescentes son producidas por microorganismos viables, no se producen señales por bacterias muertas o detritos.

Los sistemas EZ-Fluo y Milliflex Quantum desarrollan el proceso en 4 pasos muy sencillos:

  1. Filtración
  2. Incubación
  3. Tinción Fluorescente
  4. Detección y cuantificación.

El sistema está soportado por software que garantiza cumplimiento de CFR 21 parte 11 y todos los dispositivos para facilitar y garantizar la esterilidad en cada paso.

1. Filtración en EZ Fluo:

P2

En el Milliflex Quantum:

P3

2. Incubación:

P4

En el Milliflex Quantum no se requiere contar con cajas de Petri ni agar para hacer la Incubación:

No es necesario manipular la membrana

3. Tinción Fluorescente

P4

En el Milliflex la Tinción Fluorescente no requiere manipular la membrana

P6

4. Detección y Cuantificación

P7

Esta tecnología aporta varios beneficios:

  1. Resultados en un tercio del tiempo que las técnicas tradicionales
  2. Cuantificación instrumental que arroja resultados libres de errores humanos
  3. No se destruyen las colonias, de manera que se pueden usar para identificar los microrganismos con los métodos conocidos.
  4. La imagen fotográfica se constituye en un registro físico trazable que se puede adjuntar al reporte analítico.
  5. El software cumple requerimientos de regulaciones vigentes (BPL y CFR21 parte 11)
  6. Fácil validación gracias a que se basa en la misma técnica de filtración por membrana reconocida por las farmacopeas.
  7. Equipo pequeño y robusto que facilita la instalación en cualquier área del laboratorio
  8. Solución efectiva en costo lo que la hace recomendable para rutina e investigación.

Aplicaciones

Se puede aplicar en diferentes tipos de industria para evaluar:

  • Materias primas
  • Muestras de producto en proceso
  • Producto terminado
  • Muestras ambientales

P8

El segundo Hallazgo de Millipore dio origen a la plataforma MILLIFLEX RAPID Se trata de una plataforma automatizada para detección y enumeración rápida y exacta de microorganismos.

P9

El Milliflex Rapid es una solución automatizada para la detección, respuesta y resolución rápida de contaminación microbiológica en muestras filtrables a través del proceso de manufactura. El sistema mejora el control del proceso, rendimiento de producto y la liberación oportuna de los productos.

Se basa en tecnología de bioluminiscencia de Adenosin trifosfato ATP, el Milliflex Rapid suministra los resultados del ensayo de esterilidad más rápido que el método convencional de detección de contaminación, como la filtración por membrana y el cultivo. El método de preparación de muestra Milliflex ® asegura resultados confiables y consistentes. El Milliflex ® Rapid puede distinguir claramente entre desarrollo microbiológico lento y microorganismos de desarrollo rápido, asi como variaciones de su tamaño y contenido de ATP en muestras de agua.

Resultados en horas, no en días

Con el sistema Milliflex ® Rapid usted puede detectar bacterias en aproximadamente ¼ del tiempo del método actual. Milliflex rapid puede detectar y contar microorganismos viables filtrados en una membrana por debajo de 1 UFC por muestra. El software muestra los resultados de la forma familiar como UFC, por los que provee una comparación directa con los datos históricos obtenidos por los métodos tradicionales.

Tres tecnologías probadas

El Milliflex ® Rapid usa tres tecnologías probadas: Filtración por membrana, Bioluminiscencia por ATP y Análisis de imágenes para una validación fácil.

  • Filtración por membrana: Es el estándar de preparación de muestra hoy día, grandes volúmenes de producto pueden ser procesadas y cualquier sustancia inhibidora puede ser fácilmente eliminada
  • Bioluminiscencia por ATP: El ATP (Adenosin Trifosfato) es un probado indicador de viabilidad celular.
  • Análisis de imagen para enumeración de microorganismos: La concentración de ATP requerido para medir es cerca de 200 Ato moles, lo cual es equivalente a una célula de levadura u hongo o aproximadamente 100 células bacterianas, dependiendo de su estado metabólico. La sensibilidad de los reactivos, combinado con una cámara de dispositivo cargado acoplado (CCD) y un procesador de imágenes requiere solamente un corto periodo de incubación para generar suficiente ATP para detección y enumeración.

El sistema captura las señales de luz emitidas desde los microorganismos en la membrana con una cámara CCD. El software de análisis de imágenes intensifica la bioluminiscencia desde cada célula (o micro Colonia) miles de veces y un procesador de imágenes enumera los microorganismos y los despliega en la pantalla de un computador.

P10

Análisis de Imagen Automatizado

Software de análisis de imágenes tecnológicamente avanzado Milliflex ® Rapid habilita al analista para analizar agua, productos en proceso, materias primas y productos finales en una fracción del tiempo de los métodos tradicionales.

El acceso y privilegios de edición son controlados por el administrador del sistema asegurando la adquisición de datos y recuperación.

La torre de detección explora y desarrolla una imagen de las micro-colonias en la membrana.

El sistema cuenta cada micro colonia y almacena los datos para su descarga, imprimiendo y recuperando. El análisis de la muestra y los resultados son desplegados en aproximadamente dos minutos, junto con la historia del lote y la imagen electrónica de la membrana con resultados expresados en forma familiar de unidades formadoras de colonia (CFUs), los cuales pueden ser vistos también en forma tridimensional. La historia del lote permite al analista identificar tendencias de un vistazo y las imágenes electrónicas confirman los resultados de los ensayos.

Listo para cumplimiento 21 CFR Parte 11

El software de Detección y Enumeración tecnológicamente avanzado del Milliflex ® Rapid cumple los requerimientos de la regulación FDA 21 CFR parte 11 para registros electrónicos y firmas electrónicas. La poderosa característica de reporte por lotes cumple los requerimientos tecnológicos de la parte 11 del CFR 21 de la FDA para firmas electrónicas y reporte electrónico por lotes. La característica de reporte por lotes incluye capacidad de firma electrónica, desarrollo de seguimiento de auditoria y generación de datos inalterables.

Aplicación de reactivos Bioluminiscentes sobre las membranas:

Un componente integral en el sistema de detección y enumeración Milliflex® Rapid es la estación AutoSpray Milliflex ® Rapid, la cual aplica un volumen igual de dos reactivos a través de la superficie de la membrana para detectar los microorganismos vivos.

Desempeño Consistente y reproducible

La estación autospray asegura resultados reproducibles, ensayo tras ensayo, mediante el uso de un programa pre definido y probado. La aplicación del reactivo se logra usando un movimiento de adelante hacia atrás del soporte del filtro bajo el nebulizador calibrado de vidrio.

Válvulas de presión aseguran que el mismo volumen de reactivo es dispensado en cada ciclo, un compresor interno permite la operación independiente, eliminando la necesidad de equipo adicional.

Operación optimizada

En modo automático de spray, la estación Autospray suministra ambos reactivos en 90 segundos al tocar un botón. Desde el panel de control, el analista puede fácilmente iniciar la operación mediante la selección desde una lista de operaciones.

Fácil de limpiar y mantener:

La estación auto spray muestra un mensaje de alerta en la pantalla del panel de control cuando se requiere limpieza, purga o calibración, con lo que asegura el desempeño consistente y confiable a través del tiempo de vida del sistema.

La estación auto spray es una unidad de auto limpieza, está lista para re uso en cinco minutos. La unidad debe ser recalibrada cada 5000 muestras o al menos una vez cada año.

Cumplimiento regulatorio a nivel mundial

La tecnología de Bioluminiscencia de ATP usada por el Millflex ® Rapid es reconocida como método alternativo de detección por:

- FDA (1,2)

- PDA Reporte técnico No. 33: Evaluación, Validación e implementación de nuevos métodos de ensayo microbiológico. (3)

La filtración por membrana es el método recomendado para captura de microorganismos por todas las farmacopeas del mundo (USP, Europea y Japón)

El sistema Milliflex® Rapid está calibrado a un estándar internacional de luz (LNE/NIST) y cumple conformidad eléctrica para la marca CE (comunidad Europea).

Soporte y servicio

Merck Millipore provee soporte técnico y una completa oferta de servicios para ayudarle a ahorrar sus recursos de control de calidad y facilita la implementación de su Milliflex® Rapid en su rutuna diaria. Nuestro equipo altamente experimentado está para asistirlo.